南海局部海洋沉积物中真菌多样性及产酶活性初步研究

【摘要】近年来，随着陆地资源的大量开发与利用，开发海洋资源，尤其是海洋微生物资源愈发受到人们的关注。由于海洋微生物特别的生存环境，形成了独特的群落结构、遗传特性及生理机制等，使海洋微生物成为世界生物学研究的热点之一。海洋真菌作为海洋微生物中的一大类群，也备受研究人员的关注。本研究以11份南海海洋沉积物为材料，利用平板涂布法分离其中的海洋真菌，通过培养观察真菌的形态特征，并进行ITS序列分析，对分离出的真菌进行初步鉴定。针对目前工业中较为重要的功能酶类，利用6种筛选培养基对海洋真菌进行产酶活性筛选，并对其中一株产酶活性相对较高的真菌进行了产酶条件研究。研究方法和结果如下：(1)利用高盐察氏培养基、YPD培养基、玉米粉琼脂培养基、MEA培养基、改良PDA培养基、沙氏培养基和豆芽汁培养基，并添加氨苄青霉素作为抑菌剂，从11份海洋沉积物样品中共分离出1689株真菌，排除重复，初步归类为41株真菌。确定最佳分离培养基为YPD培养基。经形态学研究和ITS序列分析，初步将这些真菌鉴定为15个属：枝顶孢属(Acremonium)、Acrodontium、链格孢属(Alternaria)、曲霉属(Aspergillus)、烟管菌属(Bjerkandera)、毛壳菌属(Chaetomium)、枝孢属(Cladosporium)、Dichotomomyces、散囊菌属(Eurotium)、赤霉菌属(Gibberella)、Myrmecridium、拟青霉属(Paecilomyces)、青霉属(Penicillium)、Pseudozyma、酵母属(Saccharomyces)。其中，曲霉属(Aspergillus)和青霉属(Penicillium)为优势菌群，分别占39.00%和12.20%。菌株8m、25m和95a只能鉴定到属，其余38株真菌鉴定为25个形态种。(2)采用透明圈法，将已测序的41株真菌点接于酶筛选培养基上，每个真菌在平板上点接3个重复，28°C恒温培养3–7d。测量不同菌株的透明圈直径和菌落直径，以透明圈直径与菌落直径的差值(D)表示酶活大小。结果表明，8株真菌产纤维素酶，9株真菌产淀粉酶，5株真菌产复合酶(主要包括蛋白酶、淀粉酶及木聚糖酶活性)，16株真菌产蛋白酶，3株真菌产脂肪酶，未发现产壳聚糖酶的真菌菌株；其中有7株真菌同时产三种酶，4株真菌同时产两种酶。产酶活性大小研究表明，菌株Penicilliumsp.41m产蛋白酶活性相对较高，而Acrodontiumsp.8m和Aspergillussp.86b产复合酶活性相对较高。(3)利用摇瓶发酵培养产复合酶菌株Aspergillussp.86b，研究了培养温度、培养时间、起始pH值和接种量对菌株产酶的影响。通过单因素试验和正交试验证明，影响菌株Aspergillussp.86b发酵产酶因素的主次顺序为培养时间、接种量、培养温度和起始pH值；确定了该真菌菌株产复合酶的最佳发酵条件为：培养温度28°C、培养时间3d、起始pH值6.5、接种量6%。通过本研究证明南海局部海洋沉积物中的海洋真菌资源丰富，同时在产酶菌株方面显示出了较强的潜在价值，多数菌株具有产酶活性。因此，对南海海洋沉积物中微生物资源的研究值得深入开展。
【作者】曲佳；
【导师】邓百万；
【作者基本信息】陕西理工学院，植物学，2014，硕士
【关键词】海洋沉积物；真菌多样性；产酶活性；

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